5)菌種分離和培養(yǎng):可用采集野生的活靈芝或培養(yǎng)的活靈芝和保存的菌種?;铎`芝經(jīng)表面消毒后,用鋒快小刀,取菌蓋或芝柄組織,在無菌下接種。要儲備一定數(shù)量的菌種。菌種培養(yǎng)基的成分組成,常用的有兩種:
地瓜培養(yǎng)基:地瓜2509、葡萄糖209、瓊脂17~209、水1000m1、酸堿度(ph)6。
馬鈴薯培養(yǎng)基:馬鈴薯2509、葡萄糖209、瓊脂17~209、加水1000m1、酸堿度(ph)6。
以上兩種培養(yǎng)基均可作為菌種培養(yǎng)基。方法是將馬鈴薯或地瓜等去皮、挖去芽眼切成片或絲狀,加水500~600ml,放入搪瓷鍋內(nèi),煮開后經(jīng)15~20分鐘,用紗布、脫脂棉濾過,濾后放入瓊脂熬溶,再加各種原料。待溶解后另行濾過分裝(水分一定要保持1000m1),1.96×105p、30分鐘高壓滅菌或蒸籠90分鐘(以水沸蒸算起)。滅菌后分裝各試管中,塞上棉花塞,趁熱斜放,使培養(yǎng)基形成適當(dāng)?shù)男倍葌溆?。按常?guī)無菌操作法接種在試管中,放在25-28℃的恒溫箱或培養(yǎng)室內(nèi),培養(yǎng)7~10天即可使用。最好購買一點菌種。
6)接種時間:一般在5~10月。有恒溫條件者,全年均可培養(yǎng)。將試管中培養(yǎng)的菌種,在無菌條件下,以接種針挑取一塊菌絲(約一分硬幣直徑大小),打開裝有培養(yǎng)基廣口瓶的棉花塞,將菌絲體置于副孔接種點上,塞好棉花塞。放在培養(yǎng)室里培養(yǎng)。
(2)段木栽培
1)段木栽培用料:主要以木質(zhì)較硬的樺樹、櫟樹、蘋果樹、按樹、洋槐、懸鈴木等。段木直徑一般在5~15cm。選定樹種后立即砍伐,但不必剝皮,鋸成長為lm的段木。如果樹種含水率較高,則要堆積干燥,直至用木楔打進段木內(nèi),不見流出樹液時,便可接種。
2)菌種制備:用looml水,加蔗糖29、麥麩59制成營養(yǎng)液,煮沸半小時后撈出并按4:1比例,將木屑、麥麩培養(yǎng)料混合裝瓶,高壓滅菌,接種培養(yǎng)。待菌絲長至瓶底,再繼續(xù)培養(yǎng)10天左右即成菌種。